1024在线观看国产天堂-1024亚洲精品国产-1024亚洲-1024香蕉国产在线视频-1024手机看片国产旧版你懂的-1024你懂的国产精品

技術文章

Technical articles

當前位置:首頁技術文章阿爾茨海默病嚙齒類動物模型的制備方法

阿爾茨海默病嚙齒類動物模型的制備方法

更新時間:2019-08-30點擊次數:4103

一、衰老動物模型

 AD多發于老年人。衰老是AD肯定的危險因素。隨著世界人口的老齡化,AD的患病率顯著上升,已成為成人的第4位死因,于是出現了以衰老作為AD發病基礎的動物模型。

(一)自然衰老認知障礙動物模型

通過動物本身的自然衰老來獲得的AD動物模型,包括老齡大鼠、小鼠及猴等。這類模型的認知障礙等神經系統改變是自然發生的,更貼近AD的真實病理生理改變。Cummings等報道老齡犬腦中有Aβ沉淀斑塊,同時有相應的選擇性的行為能力損害;Higgins等報道老齡鼠可出現Aβ沉積于前腦基底區,并有記憶缺損。但這些模型一般不出現AD的SP與NFT等特征,且易死亡。

(二)快速老化小鼠模型和神經原纖維纏結

通過對AKR/J自然變異小鼠進行近交延代培養得到一種自然快速老化小鼠(senescence accelerated mouse, SAM),該家族諸多品系中的SAM P/8和SAM P/10表現出明顯的學習記憶功能減退,處于一種低緊張癡呆狀態。

(三)D-半乳糖誘導的大、小鼠亞急性衰老模型

給藥后的動物中樞神經系統出現一系列退行性變化,如海馬錐體細胞數量減少、皮質神經元蛋白質合成減少、腦組織中超氧化物歧化酶活性降低、丙二醛含量升高。表現出學習記憶能力下降、認知障礙、行動遲緩、毛發稀疏等老化征象。但此類模型同樣也未出現NTF及老年斑樣改變。

二、膽堿能損傷動物模型

哺乳動物腦內前腦基底區膽堿能神經元、海馬和皮質及它們之間的通路是學習記憶功能的重要結構基礎。AD患者前腦基底區膽堿能神經元大量損傷或死亡、突觸前乙酰膽堿的合成、ChAT(膽堿乙酰轉移酶)的活性及對膽堿的攝取能力都明顯下降,這些變化的程度與患者認知功能損害的程度呈正相關,因此人們通過各種方法來破壞動物大腦的膽堿能系統。促使其發生學習記憶障礙而達到制作AD動物模型的目的。

(一)電損毀、外科損毀模型

參照動物腦立體定位圖譜,用電灼傷的方法損毀Meynert基底核,外科手術切斷海馬-穹隆傘。破壞膽堿能及非膽堿能纖維傳入,導致實驗動物行為及神經化學方面的缺損,造成動物空間定向和記憶障礙及膽堿能神經元的丟失。但病理上未出現老年斑和NFT。1994年,Jeltsch等的實驗研究結果表明,切斷雙側海馬穹隆傘通路造成的AD模型在數月后其行為及神經化學的缺失也不能恢復。用此方法建立AD模型周期短,但手術定位難以控制,很難避免手術區鄰近組織的受損。

(二)化學損毀模型

將鵝膏蕈氨酸、喹啉酸、海仁酸注入大鼠Meynert基底核可建立AD模型,此法可造成膽堿能神經元減少、皮質ChAT活性降低,但不破壞通過此區域的神經纖維。術后海馬神經細胞明顯減少、學習記憶能力下降。但AD神經遞質缺乏是廣泛性的,此類模型只模擬了膽堿能功能減退的特征,并未復制出其他遞質功能減退的表征,且模型也同樣未出現AD的典型病理改變——老年斑和NFT,因此制模時仍需在應用藥物種類、劑量、作用部位及時間等方面進一步觀察。

(三)以Aβ為基礎的動物模型

腦內Aβ由淀粉樣蛋白前體物質(amyloid precursor protein, APP)經一系列酶的降解而來。APP是體內廣泛存在的一類跨膜蛋白質,APP在體內有兩種代謝途徑:①經由p-分泌酶、γ-分泌酶催化,在712位殘基附近斷裂產生對細胞有毒性的Aβ;②APP經α-分泌酶和γ-分泌酶催化產生可溶性的APPa(sAPPa)。值得注意的是,α-分泌酶從Aβ分子內部進行分解。避免了完整Aβ序列的產生,且sAPPa對神經細胞可產生營養、保護作用。而Aβ過度產生后沉積于腦內,引起鈣穩態失調,激活膠質細胞釋放大量炎癥介質、氧自由基,終導致廣泛的神經元變性、凋亡、突觸缺失。故認為Aβ沉積是AD發病的中心環節,因此出現了多種以Aβ為基礎的模型,同時也帶來了新藥物作用的靶點。將合成的Aβ注射到動物腦內可產生Aβ的聚集和神經毒性作用。通常注入微量的可溶性Aβ,并沒有明顯的短期的神經毒性作用。但如果注入的量很大,則促使Aβ聚集。當Aβ聚集后,容易觀察到Aβ沉積或淀粉樣變。膽堿能神經元凋亡、突觸結構減少。小神經膠質細胞及局部星形膠質細胞被激活。Nitta等將100Pg的Aβ注入大鼠腦室后,發現大鼠出現了行為障礙,如被動回避反射及水迷宮學習障礙。如果每天將2μg的Aβ通過導管注入海馬內,15d后大鼠也會出現行為障礙。這些模型說明沉積與行為(學習、記憶)障礙有關。但注射Aβ的動物模型存在三方面不足:首先,會導致一個穿透性的腦損傷;其次,無法研究Aβ本身形成的病理過程;后,注入的Aβ量很大則有一定的操作難度,因為在注入之前Aβ就很容易聚集,而控制聚集又將給在損傷部位以外的腦內得到大量散在的Aβ增加困難。

(四)鋁中毒誘導癡呆模型

人們發現外界環境危險因素在AD發病中也占有重要地位,因此建立了鋁元素慢性中毒的AD動物模型。早在1937年Scherp和Church就提出鋁可引起神經元退化的看法,1965年Klatzo等提出鋁中毒可能與AD發病有關,他們發現在AD患者與鋁中毒患者腦中均可看到NFT。此后1937年Grapper等提出鋁可能是神經毒素,他們給貓腦內直接注射鋁鹽。發現鋁具有神經毒素樣作用,導致神經纖維變性。國內有學者采用給大鼠或小鼠腹腔注射及口服鋁鹽建立模型,結果模型鼠出現大腦質量減小、學習記憶能力減退的表現。臨床資料表明,AD患者腦內鋁含量顯著高于正常值;血清鋁的水平也顯著高于對照組。綜觀有關鋁與AD發病關系的實驗研究,可以基本肯定:AD患者腦內鋁的含量明顯超過正常值:鋁對中樞神經系統有毒性損害,使神經元變性或死亡,產生NFT病理性改變,繼而表現為大腦皮質萎縮,腦質量減小,出現記憶、認知功能障礙。總之,用鋁誘導建立AD模型的方法較好,不足之處是此種AD模型出現的NFT與AD患者略有差異,并且用鋁造模周期長。

(五)缺氧所致的動物模型

研究發現AD患者實際上長期處于慢性缺氧狀態。通過剝奪嚙齒類動物的供氧,可誘導與老化腦功能相似的能量代謝障礙。由于老化和缺氧都能損害氧化代謝,并可導致相似的行為障礙,因此缺氧和老化可能有一定的相似性。該模型是先訓練動物一次性被動回避性行為,然后立即放入缺氧的環境中,動物可出現逆行性記憶保留障礙。實驗性缺氧動物模型與老年嚙齒類動物在神經化學和行為學方面相似,因此可用于評價實驗研究和治療老年性記憶障礙的藥物。這種動物模型簡單而經濟,可用于開發記憶障礙藥物的臨床前篩選。該模型的主要缺點是缺氧動物模型與不同神經遞質(包括膽堿能系統)的神經病理學改變廣泛相關,而不能表現出AD的腦區特異性膽堿能神經受損;另一個缺點是此模型缺乏與 AD腦內相似的組織病理學特征。

(六)tau蛋白過度磷酸化模型

研究表明,AD患者腦中沉積的Aβ通過抑制細胞對葡萄糖的攝入和利用而引起神經細胞退化,導致患者記憶能力減退。而在糖尿病和Apo E4攜帶者的AD高發人群中。也會出現神經細胞葡萄糖攝入率降低的現象,且用葡萄糖和胰島素合并治療能明顯改善AD患者的記憶能力。基于此,近些年出現了tau蛋白AD樣磷酸化模型。用一次性大劑量鏈佐星(streptozotocin, STZ)腹腔注射或STZ合并高脂飲食誘發小鼠糖尿病或使小鼠禁食引起神經細胞對葡萄糖的攝入和利用降低,使神經細胞內tau蛋白的N-乙酰氨基葡萄糖糖基化水平降低,游離出潛在的磷酸化位點。tau蛋白更易磷酸化。過度磷酸化改變了tau蛋白的結構和構象,終引起微管結構崩解,形成大量的NFT結構。

(七)實驗性自動免疫性癡呆模型

皮下注射純化的Torpedo膽堿能神經元中的高分子質量神經絲蛋白(NF-H),使大鼠產生持續免疫,引起室中隔和海馬神經元中IgE沉淀,神經元的密度降低,大鼠的認知功能損害,表現為短期工作記憶、空間和位置分辨障礙,這種動物模型稱為實驗性自動免疫性癡呆(EAD)。這種動物模型可復制AD的某些病理形成過程。也證明了抗膽堿能NF—H抗體在 AD神經元變性中發揮一定的作用。

(八)轉基因動物模型

AD是一種多基因的疾病,現已知的主要致病基因有4個:APP基因、PS-1基因、PS-2基因和ApoE4基因。近年來,轉基因動物取得了很大成功。APP基因是早發現的AD致病基因。APP在體內通過β-分泌酶、p-分泌酶和核內溶酶體系統降解產生淀粉樣蛋白。Hsiao用朊蛋白(pHon)啟動子轉入瑞典家族性AD的KM670/671NL突變基因,獲得了APP的過度表達。觀察到明顯的跟年齡相關的淀粉樣沉積和伴隨記憶缺陷的腦內Aβ增加。Hsiao在報告中還提到APP FVB鼠和SOD轉基因鼠雜交可以顯著延長壽命,使其有足夠的時間形成Aβ沉積。Sommer等用Thyl轉入攜帶瑞典家族性AD突變基因的APP751變異型。1年后這些小鼠也出現了沉積的淀粉樣變斑塊。Chen等進一步證實了過度表達FAD的 APP717密碼子突變的小鼠能形成除NFT外大部分AD的病變:淀粉樣斑塊的沉積、神經炎性斑、突觸和樹突蛋白的丟失、細胞骨架成分的異常磷酸化、溶酶體淤積、急性時相蛋白、反應性的星形小膠質細胞等,同時還表現出了顯著的學習和記憶障礙。Ps蛋白家族和一部分早發性家族性AD有密切關系。把PS-1轉基因鼠和Hsiao的T92576APPsw轉基因鼠雜交,可以增加Aft42的水平,但有關該模型的病理改變尚在進一步的研究之中。Chui研究了PS-1轉基因鼠。發現13個月以后(老齡鼠),神經元變性顯著加速,雖然沒有淀粉樣斑塊的形成,但有大量神經元出現細胞內Aft42沉積。

在AD患者腦內發現有增高的TGF-β,Wyss Coray建立了過度表達TGF-8的轉基因鼠, TGF-β誘導腦血管和腦膜上的A3沉積;APP和TGF-β的雙轉基因鼠中,Aβ沉積也被加速了。Beeri將人類膽堿酯酶(AChE)基因轉入小鼠體內并使其在大腦神經元內過度表達,獲得了比對照組高2倍的AChE活性。這種鼠表現出進行性發展的學習、記憶障礙。

欧美性爱XXXX黑人| 亚洲另类精品无码专区| 特黄特色三级在线观看| 亚洲AV自慰白浆喷水少妇 | 日产精品一卡2卡三卡4卡乱码| 无码少妇一区二区三区视频| 亚洲色大18成人网站WWW在线| AV蜜臀在线网站| 国产成人剧情AV麻豆映画| 护士奶头又白又大又好摸视频| 男女做AJ视频免费的网站| 日韩无码蜜桃视频| 亚洲国产欧美在线人成长黄瓜 | 亚洲一线二线三线品牌精华液 | 无码日韩人妻AV一区免费| 夜夜爽妓女77777免费观看| 菠萝菠萝蜜在线观看| 国色天香精品一卡2卡3卡老狼| 男生把手放进我内裤揉摸好爽| 撕开奶罩揉吮奶头免费视频| 国产精品99久久免费观看| 九九真实偷窥短视频| 欧美熟妇黑人ⅩXXXXX| 先锋中文字幕在线资源| 做AJ的姿势教程大全图| 国产疯狂XXXⅩ乱大交| 胯下粗长挺进人妻体内电影 | ZOOM与牛性胶ZOOM| 韩国青草自慰喷水无码直播间| 欧美〇〇无码黑人大战野结衣| 新婚少妇下面真紧| 99久久国语露脸精品国产 | 国产午夜片无码区在线观看| 男生白内裤自慰GV白袜男同| 亚洲AⅤ永久无码中文字幕| 98久9在线 | 免费| 国内精品久久久久影院优| 人妻多毛丰满熟妇av无码| 亚洲人成人无码.WWW石榴| 粉嫩av一区二区网站入口| 久久青草费线频观看| 我的私人女教师3| 波多野结衣AV一区二区无码 | 国产无套粉嫩白浆在线| 一二三四视频中文字幕在线看| 被添出水全过程免费视频| 久久精品99久久香蕉国产色戒| 少妇短裙公车被直接进入| 中文字幕人妻在线中字| 国产在线精品国自产拍影院同性| 人妻少妇无码精品专区| 一本大道AV伊人久久综合| 国产精品乱码高清在线观看| 女人带毛的真人图片| 亚洲精品无码AⅤ片桃花岛| 丰满熟女高潮毛茸茸欧洲视频 | [中文] [3D全彩H漫]新来| 国内精品一线二线三线黄| 日韩精品内射视频免费观看| 约附近的寂寞妇女| 国产曰的好深好爽免费视频| 色偷偷WWW8888| AV潮喷大喷水系列无码| 久久久无码精品午夜| 亚洲AV成人AV天堂| 国产99久60在线视频 | 传| 欧美精品黑人粗大视频| 一本久久伊人热热精品中文字幕| 国产亚洲AV手机在线观看| 色噜噜狠狠狠狠色综合久一| 99久久人妻无码中文字幕系列| 久久精品国产72国产精| 亚洲AV无码成人精品区H| 国产999精品成人网站| 欧洲RAPPER潮水太多| 中文字幕AV无码一区二区蜜芽三| 精品国产一区二区三区香蕉| 无码国产乱人伦偷精品视频| 成人精品一区二区三区网站| 成人精品一区二区三区在线观看| 日本精品一区二区三区试看| 一区二区三区熟女少妇小牛| 狠狠躁天天躁日日躁欧美| 少妇被又大又粗又爽毛片久久黑人 | 欧美黑人巨大精品VIDEOS| 亚洲精品无码专区在线播放| 国产精品视频一区国模私拍| 人妻一区二区三区高清AV专区 | 男人扒开女人的腿做爽爽视频| 亚洲乱色熟女一区二区三区蜜臀| 国产精品一国产AV麻豆| 色欲午夜无码久久久久久 | 人妻少妇AV中文字幕乱码| 2020久久国产综合精品SWA| 久久久久精品无码AV| 亚洲成a人片在线观看无码关注| 国产精品99久久免费| 熟妇五十路六十路息与子| 成人黄网站片免费视频| 人妻斩り56歳无码| JAPANESE五十路熟妇| 欧美成人精品一区二区综合| 在床上拔萝卜视频高清免费看| 久久久久久精品免费免费麻辣 | 成人午夜福利视频| 日本无人区码一码二码三码区别| 99久久精品国产一区二区三区| 蜜臀AV网站在线观看| 在线精品动漫一区二区无码| 久久综合精品国产丝袜长腿| 野花高清在线观看免费官网中文版| 精品无码无人网站免费视频 | 成人爽A毛片在线视频| 日韩成人无码中文字幕| 成人综合婷婷国产精品久久蜜臀 | 贵阳40多岁熟女高潮呻吟| 少妇人妻偷人精品无码视频| 丰满少妇女人A毛片视频| 天美传媒蜜桃传媒精东| 国产疯狂XXXⅩ乱大交| 无码人妻一区二区免费AV| 国产美女遭强高潮开双腿| 午夜无码一区二区三区在线观看| 国产特级毛片AAAAAA高潮流| 亚洲AV无码久久| 精品无码久久久久久尤物| 一二三四在线视频社区3| 久久婷婷五月综合色国产香蕉| 永久免费无码国产| 免费无码午夜福利片| GOOD电影网韩国三级无码| 日本乱熟人妻精品中文字幕| 丰满少妇女裸体BBW| 无遮挡啪啪摇乳动态图GIF| 国偷自产一区二视频观看| 亚洲乱码日产精品一二三| 久久久亚洲精品无码| 中文字幕乱码人妻一区二区三区| 女人扒下裤让男人桶到爽| 北条麻妃一区二区三区AV高清 | 人妻激情偷乱视频一区二区三区| 成 人 网 站 在线 看 免费| 天天想你视频免费观看西瓜| 国产又爽又黄又舒服又刺激视频 | 伦人伦XXX国产对白| FIREEXⅩ性欧美HD护士| 日韩精品无码人妻免费视频 | 中文字日产幕码三区的做法步骤 | chinese熟女老女人hd视频| 人妻被按摩师玩弄到潮喷| 丰满人妻一区二区三区免费视频| 为了撞上你1∨1SC| 精产国品一二三产区区| 又硬又大又长又粗又深| 破外女出血视频全过程| 国产V亚洲V天堂A无码| 亚洲S久久久久一区二区| 老师扒开粉嫩粉嫩的泬| 把腿扒开让我舔免费视频| 挽起裙子迈开腿坐上MBA | 亚洲人精品午夜射精日韩| 妺妺窝人体色WWW在线下载| 苍井空一区二区三区在线观看| 无码少妇一区二区三区| 久久久久久久精品国产亚洲| JAPANESE极品少妇| 无码AV中文一区二区三区桃花岛| 精品无码综合一区二区三区| 99久久久国产精品消防器材| 熟女人妇 成熟妇女系列视频| 精品粉嫩BBWBBZBBW| 99精品久久99久久久久| 天天躁日日躁狠狠躁欧美老妇| 精品无码一区二区三区不卡| BTА√天堂中文在线官网| 无码成人一区二区三区| 久久久久久中文字幕有精品| 宝宝怎么这么湿~别磨| 亚洲 中文字幕在线播| 蜜臀色欲AV在线播放国产日韩 | 免费无码又爽又刺激高潮| 国产99在线 | 韩国| 亚洲一线产区和二线产区的区别 | 国语做受对白XXXXX在线| 18禁无遮挡羞羞啪啪免费网站| 天黑黑影院在线观看免费中文| 久久精品国产亚洲AV麻豆图片| 扒开女人P添大荫蒂| 亚洲国产精品久久久久蜜桃 | 国产AV日韩AⅤ亚洲AV无码馆| 亚洲午夜久久久久久久久电影网| 人人爽人人爽人人爽| 黑人双人RAPPER的特点| YY8090韩国理伦片在线| 亚洲VA成无码人在线观看| 人妻av无码一区二区三区| 精品人妻无码区在线视频| 草莓视频下载APP| 亚洲一区精品无码| 天堂在/线中文在线资源8|